利用复合酶制剂去除废纸浆中胶黏物的方法

　　专利公布号：CN 106318930 A

　　申请人：华南理工大学

　　发明人：王永华　蓝东明　张泽栋　杨博　周鹏飞

　　提供一种以高温酯酶TTEST为主的复合酶制剂去除废纸浆中胶黏物的方法。

　　步骤如下：

　　(1)高温酯酶TTEST的制备：

　　将酯酶TTEST菌种接种到种子液体培养基振荡培养，再将菌种接种到发酵培养基振荡培养，制备得到高温酯酶TTEST粗酶液，将高温酯酶TTEST粗酶液纯化，用对硝基苯酚比色法测定高温酯酶TTEST的酶活。

　　利用全基因合成方法获取的TTEST酯酶的编码基因，并克隆到表达载体pET23a-CBD载体上获得重组表达载体。利用CaCl2转化法，将含有TTEST酯酶编码基因的表达质粒转入BL21(DE3)菌种中，获得基因工程菌。将酯酶TTEST的菌种接到含Amp(100ug/ml)的LB种子培养基中扩大培养，当OD值达到0.6～0.8时，将菌液按照1:100的比例接种到含Amp(100ug/ml)的L B发酵培养基中，摇至OD值为0.6～0.8时加入I PTG(20mmol/L)诱导剂进行诱导表达，18～24h后收菌。将菌液在12000r/min条件下离心10min后收集管壁细胞进行超声破碎，之后再以12000r/min条件离心10min后取上清液，即得到粗酶液。利用纤维素与酯酶进行特异性结合，之后再用3C蛋白酶进行酶切从而得到纯酶。1L菌液对应1g纤维素，常温下将粗酶液与纤维素结合30min，适时搅拌。结合后高速离心10min，弃去上清液，将吸附蛋白用PBS缓冲液洗两次。3C蛋白酶在使用前先离心、弃去上清，利用PBS缓冲液清洗2次。向吸附蛋白中加入适量PBS，按1L菌液对应1ml 3C蛋白酶的比例混匀后酶切4h或过夜。酶切后高速离心，上清液即为纯酶。之后利用对硝基苯酚比色法测定制备的高温酯酶TTEST的酶活，测得酶活为3500U/g。脂肪酶CALB为商品化脂肪酶，测得酶活为150.0U/ml。

　　(2)按照质量百分数计，将高温酯酶TTEST(45%～50%)与淀粉酶(15%～20%)、果胶酶(10%～15%)、木聚糖酶(10%～15%)、甘油(5%)、聚乙二醇(5%)、水(5%～10%)复配成复合酶制剂。

　　(3)称取100g OCC绝干浆，稀释到相应浆浓，添加一定量的酶，在一定的处理温度、pH值、处理时间、搅拌转速下(如表1)，按照TAPPIT-277胶黏物测定法利用Pulmac-MasterScreen筛分仪将浆料进行筛选，之后将筛出的胶黏物进行染色、压片，最后用扫描软件进行分析扫描，进而测得酶处理后的胶黏物含量。

　　在不加酶的情况下，用其余相同条件处理废纸浆，实验测定结果为空白组胶黏物含量。

　　复合酶制剂的添加量为废纸浆绝干浆质量的0.1%～1.0%，处理温度为40～80℃，处理时间45～120min，pH为6.0～9.0，搅拌转速为100～150r/min。